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        哺乳动物细胞重组蛋白工程

        哺乳动物细胞重组蛋白工程

        • 作者
        • 王天云、贾岩龙、王小引等著

        《哺乳动物细胞重组蛋白工程》围绕建立哺乳动物细胞高效表达体系所需的关键技术,从哺乳动物细胞、基因工程、载体工程、细胞工程、培养基优化、培养工艺和重组蛋白的分离及纯化、分析鉴定、重组蛋白糖基化修饰与控制、重组抗体高效表达与质量控制以及重组蛋白技术产品的研究开发与管理等方面详细介绍了哺乳动物细胞重组蛋白工程相关的理论和技术。 本书内容反映了近十年来哺乳动物细胞重...


        • ¥120.00

        ISBN: 978-7-122-37016-7

        版次: 1

        出版时间: 2020-10-01

        图书介绍

        ISBN:978-7-122-37016-7

        语种:汉文

        开本:16

        出版时间:2020-10-01

        装帧:平

        页数:357

        作者简介

        王天云,博士,教授,博士生导师。新乡医学院“太行学者”特聘教授。河南省重组药物蛋白表达系统国际联合实验室及生物创新药物工程技术研究中心主任,中国生物化学与分子生物学会理事,河南省生物化学与分子生物学会理事长,教育部“长江学者”,国家科技进步奖评审专家。主持国家自然科学基金4项,省重大科技专项1项,创新杰出人才项目1项;参与国家“863”课题、国家重大科技专项各1项。获省科技进步二等奖2项、三等奖1项。申请国家发明专利35项,已授权16项。发表研究论文86篇,其中SCI收录53篇,被引1076次。长期从事哺乳动物细胞表达系统的研究,建立了国际水平的哺乳细胞表达系统,包括高效表达载体、细胞系及培养基。已实现技术转移2项,专利转化8项。

        精彩书摘

        《哺乳动物细胞重组蛋白工程》围绕建立哺乳动物细胞高效表达体系所需的关键技术,从哺乳动物细胞、基因工程、载体工程、细胞工程、培养基优化、培养工艺和重组蛋白的分离及纯化、分析鉴定、重组蛋白糖基化修饰与控制、重组抗体高效表达与质量控制以及重组蛋白技术产品的研究开发与管理等方面详细介绍了哺乳动物细胞重组蛋白工程相关的理论和技术。 本书内容反映了近十年来哺乳动物细胞重组蛋白工程领域的最新进展,可作为生物制药相关专业本科生、研究生及从事生物制药的广大科研工作人员的参考用书。

        目录

        第一章适合重组蛋白表达的哺乳动物细胞1
        第一节CHO细胞表达系统3
        一、CHO细胞历史与分类3
        二、CHO细胞表达系统的优点10
        三、CHO细胞培养13
        第二节HEK293细胞表达系统17
        一、HEK293细胞的分类与优点17
        二、HEK293细胞培养与鉴定19
        第三节其他哺乳动物细胞21
        一、人源化细胞系21
        二、非人源化细胞系23
        参考文献24
        
        第二章基因工程28
        第一节基因工程简介28
        一、基因工程概念28
        二、基因工程的发展史29
        三、基因工程的应用和基因工程医药的前景32
        第二节哺乳动物细胞基因工程35
        一、目的基因获取36
        二、载体系统37
        三、DNA的体外重组45
        四、重组DNA的转化49
        五、重组DNA的筛选与鉴定49
        六、目的基因的表达50
        参考文献52
        
        第三章载体工程55
        第一节表达载体元件的优化56
        一、启动子56
        二、增强子66
        三、多聚腺苷酸尾67
        四、内含子67
        五、内部核糖体进入位点和F2A68
        六、选择标记69
        七、翻译与分泌优化69
        第二节染色质调控元件71
        一、核基质附着区72
        二、遍在染色质开放元件75
        三、绝缘子75
        四、稳定抗阻遏元件76
        第三节靶基因整合77
        一、位点特异性重组系统77
        二、基于核酸酶和DNA修复途径的位点特异性整合79
        第四节非靶向转基因整合80
        一、转座子80
        二、慢病毒载体80
        参考文献81
        
        第四章转染与筛选87
        第一节细胞转染87
        一、细胞转染的原理87
        二、细胞转染方法88
        第二节细胞转染后的筛选93
        一、瞬时转染与稳定转染93
        二、稳定细胞系的筛选94
        三、CHO细胞加压筛选99
        四、HEK293细胞表达系统102
        参考文献106
        
        第五章基因组编辑与细胞工程108
        第一节基因组编辑技术109
        一、概念109
        二、常用的基因组编辑技术109
        第二节CRISPR/Cas9技术在哺乳动物细胞中的应用117
        一、基因的破坏119
        二、位点特异性基因整合120
        三、基因激活或抑制120
        四、基因组水平目的基因敲除的筛选121
        五、基因编辑应用实验设计121
        六、脱靶分析124
        第三节CHO细胞工程125
        一、目的基因126
        二、细胞工程常用技术131
        三、抗凋亡工程134
        四、代谢工程调控135
        五、细胞骨架与细胞周期工程136
        六、蛋白质翻译后修饰工程136
        七、蛋白质合成工程138
        参考文献139
        
        第六章动物细胞培养基及其优化144
        第一节细胞培养基145
        一、细胞培养基简介145
        二、动物细胞培养基的分类146
        三、细胞培养基的相关政策与标准151
        四、细胞培养基的主要成分162
        五、细胞培养基的理化性质170
        六、细胞培养基的灭菌及储存171
        七、细胞培养基的配制173
        第二节CHO细胞培养基177
        一、CHO细胞培养基概况177
        二、CHO细胞无血清培养基的成分组成及优化179
        第三节其他细胞系培养基182
        一、HEK293细胞系培养基182
        二、HeLa细胞系培养基183
        参考文献184
        
        第七章培养工艺与大规模培养188
        第一节动物细胞大规模培养参数189
        一、温度189
        二、通气189
        三、pH190
        四、渗透压190
        五、搅拌190
        六、防止污染190
        第二节动物细胞大规模培养191
        一、动物细胞大规模培养反应器191
        二、动物细胞大规模培养操作方式194
        参考文献231
        
        第八章哺乳动物细胞重组蛋白的分离及纯化234
        第一节重组蛋白样品的预处理234
        一、透析法235
        二、超滤法235
        三、冷冻干燥法236
        四、双水相萃取法236
        第二节重组蛋白分离纯化的原理及方法237
        一、蛋白质沉淀237
        二、亲和色谱242
        三、高效液相色谱247
        四、分子筛色谱254
        五、离子交换色谱256
        六、其他纯化技术267
        参考文献269
        
        第九章重组蛋白分析与鉴定271
        第一节重组蛋白理化性质分析272
        一、重组蛋白的电荷异质性分析272
        二、重组蛋白分子量测定275
        三、重组蛋白的其他性质277
        第二节重组蛋白定量分析技术278
        一、标准定量法279
        二、比色分析法280
        三、紫外吸收法282
        四、ELISA测定282
        五、蛋白质印迹法283
        第三节空间结构分析283
        一、蛋白质的空间结构284
        二、X射线衍射晶体分析285
        三、核磁共振287
        四、生物质谱技术290
        参考文献292
        
        第十章重组蛋白糖基化修饰与控制295
        第一节糖基化修饰类型及其作用295
        一、糖基化及其修饰类型295
        二、糖基化修饰的生物学作用297
        第二节重组蛋白糖基化工程及其应用299
        一、重组蛋白糖基化工程299
        二、重组蛋白糖基化修饰改造策略299
        三、重组蛋白糖基化工程的应用301
        第三节重组蛋白糖基化控制302
        一、基因组学水平302
        二、系统生物学水平305
        三、质量控制与评价306
        参考文献308
        
        第十一章重组抗体质量控制311
        第一节重组抗体生产细胞的质量控制312
        一、建构工程细胞和细胞库312
        二、细胞质控313
        第二节重组抗体的质控标准物质313
        一、理化对照品的结构验证313
        二、活性标准品的协作标定314
        第三节重组抗体生产产品的质量控制315
        一、产品质量一致性分析315
        二、生物学活性测定317
        三、蛋白质含量及纯度测定318
        四、残留杂质分析319
        五、安全性和其他检测项目319
        第四节重组抗体生产实例——质量属性评价319
        一、还原型毛细管凝胶电泳测定重组抗体的纯度及杂质319
        二、分子排阻高效液相色谱测定重组抗体的纯度及杂质319
        三、分子排阻色谱分离静态光散射测定聚体的分子量320
        四、成像毛细管等电聚焦电泳检测电荷异质性320
        五、圆二色谱分析抗体分子的结构320
        参考文献321
        
        第十二章重组蛋白药物的研究开发与管理322
        第一节重组蛋白药物研究开发的一般过程322
        一、上游研究323
        二、中试研究324
        三、临床前研究326
        四、临床研究328
        五、新药临床研究与生产的申报和审批330
        第二节重组蛋白药物研究开发的相关法规333
        一、重组蛋白技术产品研究开发相关法规的主要内容333
        二、研发各个环节的质量管理规范337
        第三节重组蛋白技术产品的生物安全问题339
        一、重组蛋白技术产品及其产品生物安全问题的范围340
        二、重组蛋白技术产品及其产品生物安全问题的预防和控制341
        三、生物安全性评价342
        参考文献344
        
        附录中英文词汇表347
        

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